SEGURIDAD DE TOYOCERIN |

Últimos estudios que respaldan la seguridad de TOYOCERIN®

Aquí pueden encontrar la entrevista con el presidente de Rubinum, el Sr. Lau Andersen, donde explica la situación de Toyocerin: the interview

Lista de estudios publicados que respaldan la seguridad de Toyocerin:

The Identification of Intrinsic Chloramphenicol and Tetracycline Resistance Genes in Members of the Bacillus cereus Group (sensu lato). H. Glenwright et al. / Frontiers in Microbiology, Vol. 7, Art. 2122 (2017). doi: 10.3389/fmicb.2016.02122 (Disponible bajo solicitud)
Description of Bacillus toyonensis sp. nov., a novel species of the Bacillus cereus group, and pairwise genome comparisons of the species of the group by means of ANI calculations. G. Jimenez et al. / Systematic and Applied Microbiology 36 (2013) 383-391. (Disponible bajo solicitud)
Complete genome sequence of the type strain of Bacillus toyonensis BCT-7112T, the active ingredient of the feed additive preparation TOYOCERIN. Genome Announcements, noviembre/diciembre 2013, Vol. 1, N.º 6, e01080-13: clic aquí

Comparison of procedures for the extraction of supernatants and cytotoxicity tests in Vero cells, applied to assess the toxigenic potential of Bacillus spp. and Lactobacillus spp., intended for use as probiotic strains. A.R. Blanch et al. / Journal of Microbiological Methods 103 (2014) 64–69 (Disponible bajo solicitud)
Validation List no. 155 by The ICSP (Comité Internacional de Sistemática de Procariotas: organismo que supervisa la nomenclatura de procariotas, determina las reglas por las que se nombran y cuya Comisión Judicial emite Opiniones sobre asuntos taxonómicos, revisiones del Código Bacteriológico). Lista de nuevos nombres y nuevas combinaciones previamente efectivas pero no válidamente publicadas: clic aquí

International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2014), 64, 1–5 DOI 10.1099/ijs.0.060285-0 (Disponible bajo solicitud)
The use of a porcine intestinal cell model system for evaluating the food safety risk of Bacillus cereus probiotics and the implications for assessing enterotoxigenicity. M. Trapecar et al. (2011) APMIS 119:877-884 (Disponible bajo solicitud)
Literature review on the safety of Toyocerin, a non-toxigenic and non-pathogenic Bacillus cereus var. toyoi preparation. L.D. Williams et al. / Regulatory Toxicology and Pharmacology 55 (2009) 236–246 (Disponible bajo solicitud)
Diversity of Bacillus cereus group strains is reflected in their broad range of pathogenicity and diverse ecological lifestyles. Siele Ceuppens, Nico Boon, Mieke Uyttendaele: clic aquí

HISTORIA DE LA AUTORIZACIÓN DE TOYOCERIN EN LA UNIÓN EUROPEA (1994–2014)

Bacillus cereus var. toyoi NCIMB 40112/CNCM I-1012 (B. toyoi) (TOYOCERIN®) fue autorizado por primera vez por la Comisión Europea en 1994 para su uso como aditivo en la alimentación de cerdas, lechones y cerdos. Posteriormente, también fue autorizado para su uso en aves, bovinos y conejos.

En diciembre de 2001, el Comité Científico de Nutrición Animal (SCAN) concluyó que Toyocerin®:

no produce ni tiene la capacidad de producir las toxinas encontradas en otras cepas de cereus;
no transfiere resistencia a antibióticos a otras bacterias;
es seguro para las personas que lo manipulan;
es seguro para su uso en los animales objetivo.

En 2009, Toyocerin fue clasificado como “Generalmente Reconocido como Seguro” (GRAS) por el Panel de Expertos de EE. UU. (ver Certificado GRAS).

En octubre de 2012, el Panel FEEDAP de la EFSA adoptó una Opinión Científica concluyendo que la cepa de B. cereus en Toyocerin®:

contiene determinantes de resistencia a dos antibióticos, uno de los cuales puede atribuirse a una resistencia adquirida;

posee todos los genes codificantes de las enterotoxinas hemolíticas y no hemolíticas. Dado que los dos operones presentan la misma organización que las cepas patógenas de cereus, y que no se ha detectado ninguna mutación que afecte la transcripción o traducción, se debe asumir que la cepa tiene la capacidad de elaborar toxinas funcionales, representando un riesgo para quienes estén expuestos al microorganismo.

Con base en esta Opinión Científica, la Comisión Europea adoptó el Reglamento de Ejecución (UE) N.º 288/2013 del 25 de marzo de 2013, relativo a la suspensión de la autorización de Bacillus cereus var. toyoi como aditivo en la alimentación animal para todas las especies animales.

Sin embargo, el mismo reglamento contempla la posibilidad de presentar datos complementarios relativos a la seguridad de uso de Bacillus cereus var. toyoi que aporten nuevos elementos que permitan reconsiderar la evaluación realizada.

En consecuencia, en diciembre de 2013 Rubinum S.A. presentó al Panel FEEDAP de EFSA datos complementarios, incluyendo nuevos estudios que respaldan:

una nueva clasificación taxonómica del microorganismo como una nueva especie de Bacillus (es decir, Bacillus toyonensis);
la no transferibilidad de los genes de resistencia a antibióticos;
la no funcionalidad de los genes de enterotoxinas presentes en el genoma de la cepa.

NATURALEZA INTRÍNSECA Y NO TRANSFERIBILIDAD DE LOS GENES DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS PRESENTES EN EL GENOMA DE BACILLUS TOYONENSIS

GUÍA DE LA EFSA SOBRE LA EVALUACIÓN DE LA SENSIBILIDAD BACTERIANA A LOS ANTIMICROBIANOS

(EFSA Journal 2012;10(6):270)

EVIDENCIAS PRESENTADAS A EFSA EN DICIEMBRE DE 2013

Si la CIM > valores de corte:

Es necesario distinguir entre resistencia adquirida y resistencia intrínseca. La naturaleza estructural y la base genética de la resistencia a antimicrobianos deben demostrarse mediante el análisis de una selección representativa de cepas pertenecientes a la misma unidad taxonómica que la cepa bacteriana utilizada como aditivo en piensos.

Dado que la resistencia intrínseca es específica de una especie o género bacteriano, un requisito indispensable es la correcta identificación de la cepa a nivel de especie mediante métodos de taxonomía molecular.

B. toyonensis BCT-7112 T se identifica como una nueva especie dentro del grupo B. cereus mediante cálculos ANI. (Ver artículo revisado por pares 1)
B. toyonensis muestra resistencia al cloranfenicol y a la tetraciclina (CIM > 8 mg/L)
Copias únicas de los genes cat y tetM están presentes en una región estructuralmente conservada del cromosoma de B. toyonensis. (Ver información genómica en el artículo 2)
Ninguno de los dos genes está flanqueado por elementos genéticos móviles ni por ningún otro posible mecanismo de transferencia génica horizontal. (Ver información genómica en el artículo 2)
Ortólogos de los genes cat y tetM están también presentes en todos los genomas de las cepas pertenecientes a la misma unidad taxonómica de B. toyonensis BCT-7112 T, lo que indica un ancestro común.
El contenido de guanina-citosina (G+C) en los genes cat y tetM es coherente con el contenido global de G+C del genoma de B. toyonensis.
La resistencia a antibióticos presente en B. toyonensis BCT-7112 T está asociada a un posible mecanismo putativo desconocido en el que se ve implicada una región intergénica plasmídica ger IC-nuc B, aunque no relacionada con ningún gen de resistencia a antibióticos. (Ver información genómica en el artículo 2)

El uso de B. toyonensis como aditivo en piensos no incrementa significativamente la cantidad de bacterias resistentes ya presentes en el tracto intestinal de los animales objetivo. (Ver artículo 3)

AUSENCIA O NO FUNCIONALIDAD DE LOS GENES CODIFICANTES DE ENTEROTOXINAS Y DE LA SINTASA DE CEREULIDA EN BACILLUS TOYONENSIS

GUÍA DE LA EFSA SOBRE LA EVALUACIÓN DEL POTENCIAL TOXIGÉNICO DE ESPECIES DE BACILLUS UTILIZADAS EN NUTRICIÓN ANIMAL

(EFSA Journal 2014;12(5):3665)

EVIDENCIAS PRESENTADAS A EFSA EN DICIEMBRE DE 2013

Evaluación de especies pertenecientes al grupo Bacillus cereus

Las toxinas de Bacillus cereus consideradas como agentes causantes de enfermedades gastrointestinales son: Nhe, Hbl, CytK y cereulida.

Si se proponen cepas pertenecientes al grupo taxonómico B. cereus para su uso directo en la producción animal, debe secuenciarse el genoma completo (incluyendo cromosoma y plásmidos) y realizarse un análisis bioinformático para buscar genes codificantes de enterotoxinas y de la sintasa de cereulida.
En caso de encontrar evidencias de homología, debe demostrarse la no funcionalidad de dichos genes (por ejemplo, mediante mutaciones o deleciones).

Las toxinas de Bacillus cereus consideradas como agentes causantes de enfermedades gastrointestinales son: Nhe, Hbl, CytK y cereulida.

Si se proponen cepas pertenecientes al grupo taxonómico B. cereus para su uso directo en la producción animal, debe secuenciarse el genoma completo (incluyendo cromosoma y plásmidos) y realizarse un análisis bioinformático para buscar genes codificantes de enterotoxinas y de la sintasa de cereulida.
En caso de encontrarse evidencia de homología, debe demostrarse la no funcionalidad de dichos genes (por ejemplo, mediante mutaciones o deleciones).

El genoma completo de B. toyonensis ha sido completamente secuenciado y anotado (5,03 Mb de tamaño; un único cromosoma y dos plásmidos). (Ver información genómica en el artículo 2)
El análisis bioinformático del genoma ha revelado que:

– El gen de la enterotoxina CytK no está presente

– El operón que codifica la sintasa de cereulida carece de los genes cesD, cesH, cesP y cesT, por lo que no es funcional.

– Los operones Nhe y Hbl presentan cambios importantes en los aminoácidos de las proteínas codificadas NheC y Hbl L2, lo cual demuestra la no funcionalidad de ambas enterotoxinas.

Nuevas evidencias in vitro sobre la no funcionalidad de los operones Nhe y Hbl:

– Resultados de Western blot: B. toyonensis no tiene capacidad para producir el componente L2 de Hbl ni el componente NheC de Nhe.

– Prueba de citotoxicidad en células Vero: B. toyonensis no presenta citotoxicidad a la concentración máxima de sobrenadante recomendada por EFSA. (Ver artículo revisado por pares 4)

toyonensis no mostró citotoxicidad en tres líneas celulares intestinales (por ejemplo, líneas celulares porcinas y humanas). (Ver artículo revisado por pares 5)

Principio del formulario

Ver el resumen aquí en el archivo PDF

Certificado GRAS:

En julio de 2014, tras revisar los datos adicionales presentados por Rubinum en diciembre de 2013, una nueva opinión de la EFSA volvió a afirmar que B. toyonensis tiene la capacidad de elaborar toxinas funcionales y, por tanto, representa un riesgo para los humanos expuestos al organismo, así como un riesgo de diseminación de genes codificantes de resistencia a tetraciclina y cloranfenicol, antibióticos de importancia en medicina humana y veterinaria. (Ver EFSA Journal 2014;12(7):3766 [17 pp.]. DOI: 10.2903/j.efsa.2014.3766)

En agosto de 2015, la Comisión Europea revocó las autorizaciones de Toyocerin® para su uso en animales en la UE. (Ver DO L 217, 17.8.2015, p. 1)

Desde su primera autorización en Japón en 1975, Toyocerin® se ha utilizado en nutrición animal a nivel mundial durante más de 40 años sin que se haya reportado ningún caso conocido de toxicidad o problema de seguridad por parte de las autoridades competentes, ya sea en relación con las especies objetivo, el personal que manipula el producto o el medio ambiente.